Q Sepharose 6FF预装柱说明书

货号：YA2521

规格：1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL

保存：2-8℃

产品说明：

    Q Sepharose 6FF 是一种强阴离子交换树脂，离子交换基团为-O-CH₂CHOHCH₂OCH₂CHOHCH₂N⁺(CH₃)₃ ，本产品以高交联的6%琼脂糖为介质，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。离子交换树脂广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

表1：介质性能参数

纯化流程：

1、Buffer 的准备 

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm 滤膜过滤。

所使用的平衡液和洗脱液，根据不同离子交换填料自行选择基。本原则是低盐上样，高盐洗脱。

2、样品准备 

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3、样品纯化 

预装柱产品，可以用各种常规的中低压色谱系统， 以AKTA 仪器使用为例介绍 Q Sepharose 6FF预装柱使用方法。 

1) 水洗：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。

2) 平衡：使用至少5倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。

3) 上样：利用泵或样品环上样。

注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。

4) 洗杂：用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少 10-15 个柱体积），洗杂流速与平衡时一致即可。 

5) 洗脱：用洗脱液采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。 梯度洗脱可以用 20 倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。

6) 水洗：用2-3倍柱体积的1M NaCl溶液甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用5-10倍柱体积的去离子水冲洗填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。

4、SDS-PAGE检测

将纯化过程中收集的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

填料清洗 

离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。 

去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法 

   用2倍柱体积的 1M NaOH 溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4清洗。 

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质 

   用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton X-100 清洗，然后立即用5倍柱体积的 PBS，pH 7.4 清洗。

去除一些离子键结合物质 

   用3-4倍柱体积的2M NaCl 清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH 7.4 清洗。

备注：20%乙醇可以防止微生物的生长，20%乙醇保存的介质储存在2-8℃。

常见问题