细胞在面对外界环境刺激（如氧化应激、热休克、DNA损伤、营养剥夺等）时，会迅速启动一系列信号通路和转录翻译调控机制，以维持内稳态或诱导凋亡。这一过程被统称为细胞应激反应（cellular stress response），在疾病发生、药物响应和衰老等领域具有重要研究价值。

然而，应激反应往往具有快速启动、短时间变化剧烈、涉及多层次蛋白调控等特征，使得生物化学方法难以全面捕捉其动态变化。稳定同位素标记细胞培养SILAC标记技术作为一种代谢标记+定量质谱手段，近年来在应激研究中展现出独特优势。

一、SILAC标记技术

SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）是一种通过在细胞培养基中添加轻/重同位素氨基酸（如Lys-0 vs. Lys-8）来实现细胞内源蛋白质层面的同位素标记的方法。其核心优势包括：

1、定量准确性高：样本共处理、共上机，避免批次差异；

2、数据重现性强：适合时间序列实验与细微表达变化的监测；

3、生理相关性好：标记发生在活细胞水平，能较真实地反映应激过程中的蛋白调控。

因此，SILAC标记特别适合研究“某种刺激作用下细胞内蛋白质的整体响应过程”。

二、实验设计：SILAC+细胞应激反应处理的三步策略

一个标准的“SILAC+应激反应”实验可分为以下三个核心步骤：

Step 1：细胞标记与条件设置

（1）轻标记组（L）：正常培养条件，作为对照；

（2）重标记组（H）：在含Lys-8/Arg-10的培养基中培养，并在适当时点施加应激刺激（如过氧化氢、热休克、UV照射等）。

可根据研究目的扩展为三通道设计，例如中等标记组用于短时应激处理，构建时间梯度。

Step 2：细胞裂解与蛋白共处理

（1）轻/重标记细胞处理完毕后进行裂解，将蛋白等量混合；

（2）经蛋白消化后进入LC-MS/MS质谱分析阶段；

（3）通过重/轻肽段相对丰度（H/L ratio）精确反映应激处理所引发的蛋白表达变化。

Step 3：数据分析与功能解读

（1）使用MaxQuant、Proteome Discoverer等工具进行肽段识别与定量；

（2）结合GO分析、KEGG富集、GSEA等手段，解析应激响应相关的信号通路和蛋白网络；

可进一步整合磷酸化组等数据，构建多组学联合模型。

三、SILAC在细胞应激反应研究中的优势总结

特别是在研究细胞快速反应过程、低丰度信号蛋白调控或药物应激响应时，SILAC提供了无可替代的定量维度。

百泰派克生物科技依托先进的定量质谱平台与成熟的SILAC实验体系，为细胞应激研究提供端到端解决方案：

* 高标记效率细胞培养体系（>98%氨基酸替代率）；

• 个性化应激处理方案设计与时间点选取；
• Orbitrap Exploris 480 / timsTOF高分辨质谱精准定量；
• 差异蛋白筛选 + GO/KEGG功能注释 + 蛋白网络构建；
• 可选 PTM 富集服务（如磷酸化组联用研究）；

我们已成功服务多位PI课题，包括ROS介导的线粒体损伤研究、热应激诱导的凋亡通路筛选、药物刺激下的转录后调控机制探索等。细胞应激反应不是简单的“打开-关闭”机制，而是一场协调精密、动态调节的分子交响。SILAC技术为我们提供了一把精确的“定量尺子”，帮助揭示这些微妙的调控过程。在应激研究中，不论您关注的是抗氧化机制、细胞凋亡、蛋白折叠压力还是药物响应机制，SILAC标记都能为您提供系统可靠的量化支持。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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